多发性骨髓瘤（MM）是一种浆细胞恶性增生性血液肿瘤，患者骨髓内有大量异常浆细胞增殖，血清中出现异常的单克隆免疫球蛋白。发病率占血液肿瘤的10％，中、老年人中发病率较高。新近报道的癌基因垂体瘤转化基因（pituitary tumor-transforming gene , PTTG），其高表达在促进细胞增殖、转化及肿瘤发生中具有十分重要的作用, PTTG在恶性肿瘤中的高表达和转化能力证实了其与肿瘤的发生有关［1］。国内外已有报道PTTG在胃癌［2］和乳腺癌 ［3］等多种肿瘤中高表达，但PTTG在MM中的表达尚未见文献报道。我们用RT-PCR方法检测33例MM患者中PTTG的表达情况,进一步分析PTTG与MM的关系。

 

　　材料和方法

 

　　临床资料

　　33例MM患者来自山东大学齐鲁医院2003年3月至2005年5月的门诊及住院病人，其中初诊MM 14例、复治19例。全部病例均经骨髓涂片、免疫球蛋白定量、血清M蛋白电泳、X线等检查确诊。33例病人中男22例，女11例，年龄54-76岁，中位年龄66岁。按照M蛋白免疫学分型：IgG型18例，IgA型7例，IgD3例，轻链型5例。住院患者应用MP方案(马法兰、泼尼松)、M2方案（马法兰、泼尼松、长春新碱、环磷酰胺）、VAD方案（长春新碱、阿霉素、地塞米松）并配合应用反应停多次化疗。10例对照者为门诊同期就诊的良性血液病患者（缺铁性贫血、巨幼细胞性贫血和白细胞减少症），男6例，女4例，年龄18-64岁，中位年龄38岁。

 

　　试剂与仪器

　　PBS（pH 7.4）缓冲液购自武汉博士德生物工程有限公司。淋巴细胞分离液购自济南爱博公司。 -80℃超低温冰箱为日本Sanyo公司产品，TGL－16B型台式高速离心机为上海安亭科学仪器厂制造， RT-PCR试剂盒（购自Progoma公司）由下列成分组成：  GIT变性液（10 ml）， 2 mol/L NaOAc (pH 4.0)(1 ml)，MMLV  逆转录酶200 U/μl(20 μl)，逆转录反应体系，Taq DNA 聚合酶1 U/μl (40 μl)，PCR反应体系，去RNase水。水平电泳槽为北京六一试验仪器厂产品；PTC-150型PCR扩增仪为美国MJ Reseach公司产品；EC250-90多功能电泳仪为美国EC公司产品；ZF-4型多功能紫外投射反射分析仪为上海长明光学电子仪器厂制造； 1D Image Analysis Software凝胶分析系统为美国Kodak公司产品。

 

　　实验方法

　　分离单个核细胞所有病例均在无菌条件下抽取骨髓2 ml并将其注入EDTA抗凝试管中, 加入4 ml PBS(pH 7.4)缓冲液稀释。采用淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离单个核细胞，-80℃保存备用。

　　总RNA的提取采用异硫氰酸胍－苯酚－氯仿一步法提取细胞总RNA。

　　所抽提总RNA经分光光度计测定260和280 nm处吸光度（A）值，A260/A280值在1.85-1.98者用于RT-PCR。